CHIRAL-AGP柱
ChromTech AGP 手性柱
CHIRAL-AGP柱
α－酸糖蛋白（AGP）是一種非常穩定的蛋白質
它不溶于各種有機溶劑，耐高溫以及較高或較低
的PH值。AGP是CHIRAL-AGP柱的手性選擇
體，它涂敷在5μm的球形硅顆粒之上。CHIRAL
-AGP柱適用于反相色譜，用途十分廣泛，是所有
手性柱中應用范圍zui廣的，可以分離所有類型化合
物、胺（伯，仲，叔，季胺）、酸（強和弱）、非光
解質（酰胺，酯，醇，亞砜等）該柱的手性選擇性
及保留值可以通過改變流動相的PH、緩沖液的濃
度和性質以及有機改性劑的濃度來調節。因此它是
目前使用zui廣泛的手性柱之一

 

CHIRAL-AGP
α－酸糖蛋白（AGP）是一種非常穩定的蛋白質,它不溶于各種有機溶劑，耐高溫以及較高或較低的PH值。AGP是CHIRAL-AGP柱的手性選擇體，鍵合5μm的球形硅顆粒。CHIRAL -AGP柱適用于反相色譜，用途十分廣泛，不僅能用于直接分離沒有衍生物的對映異構體，也能分離分子量很廣的藥物化合物的對映異構體。CHIRAL-AGP 是目前使用zui廣泛的手性柱之一。能分離的化合物：
• 胺（伯、仲、叔、季胺）
• 酸（強酸、弱酸）
• 非光解質（酰胺、酯、醇、亞砜等）
尤其還能分離坦索羅辛，分離度達1.5以上。
應用范圍
在制藥公司、醫院、大學和化工廠，CHIRAL-AGP用于對映體的純度分析及生物分析。隨著應用范圍的擴大，半制備柱也可分離純的對映異構體。
流動相
大多數的分離都是非常簡單的流動相系，水緩沖流動相與低濃度有機溶劑，如異丙醇或乙腈。該柱的手性選擇性及保留值可以通過改變流動相的PH、緩沖液的濃度和性質以及有機改性劑的濃度來調節。絕大多數（>95％）的分離使用上述簡單的流動相。但是，控制相為DMOA（N,N-二甲基辛胺）、辛酸和丁胺化合物時可提高對異構體的選擇性。
尺寸
CHIRAL-AGP提供內徑為2，3，4和10mm，長度為50，100和150mm幾種類型的柱子。保護柱提供長10mm、內徑2，3，4mm三種類型。

              北京京京時代科技：57737872（010）

CHIRAL-AGP 100.4操作說明
1、安裝
AGP100.4出貨溶劑為15%異丙醇蒸餾水溶液。首先用蒸餾水沖洗，開始流速較低，然后慢慢增加到0.5ml/min，并維持2mins，隨后流速增加到0.8-0.9ml/min時保持10min，使用流動相平衡色譜柱，流速為0.8-0.9ml/min。
為了保護分析柱不被高親和力和顆粒雜質污染，使用保護柱，且必須定期更換保護柱，否則將影響分析柱的性能，用于生物分析時尤為重要。
2、保存
色譜柱室溫保存。使用時，可以在色譜系統中過夜。但是當緩沖鹽中沒有有機改性劑，或者有機溶液中含有低濃度乙腈時，必須非常小心，因為在這樣的流動相中微生物生長迅速。所以流動相必須現場配制。周末或者短期保存，可將色譜柱置于10%異丙醇的蒸餾水中。長時間的保存，請保存在15%的異丙醇蒸餾水中，使用前，請重復操作上面的安裝步驟。
3、流動相組成
使用不同種類的緩沖液能得到的分離效果，比如：磷酸鈉或磷酸鉀緩沖液，乙酸銨或乙酸鈉緩沖液，甲酸甲酯或檸檬酸緩沖液。濃度范圍0.01-0.1M，正常：10-20mM。
4、pH
色譜柱pH范圍：4-7，pH值長時間的大于7或者小于4，都可能縮短色譜柱壽命，導致二氧化硅分解。
5、有機改性劑
使用下列有機改性劑：1-丙醇，異丙醇，甲醇，乙醇和乙腈，丙醇和異丙醇及乙腈是使用zui頻繁的有機改性劑。無電荷改進劑的類別和濃度對分離因子的影響很大。如：1-丙醇，異丙醇和乙腈在異構體選擇性方面有很大的不同，見方法開發部分。使用陽離子和陰離子改性劑也能調整保留時間和異構體選擇性。但是，由于對基體的高親和力，有些改性劑很難全部洗脫，這樣，可能影響色譜柱的性能。我們使用無電荷的、陰離子的、陽離子的改性劑。
室溫范圍20-25℃，但是色譜柱也能在高于或低于該溫度下使用，然而當色譜柱使用溫度過高時，對所有硅膠基色譜柱，都將縮短色譜柱壽命。
6、樣品
當進樣針體積為10-20μL時，的樣品濃度低于0.10mg/ml，如果可能，將樣品溶解在流動相中，如果樣品在流動相溶解性不好，加一些高濃度的有機溶劑改性劑，但是有機改性劑的濃度太高，小心引起緩沖鹽析出沉淀。避免將樣品溶在有機溶劑中。不要注射不干凈的樣品或者樣品中包含有未溶解化合物。在生物分析過程中，使用分離技術過濾樣品溶液，定期更換保護柱。
7、清洗色譜柱
如果色譜柱被疏水性原料污染了，將色譜柱反過來（不接檢測器），用25%的異丙醇蒸餾水溶液沖洗一個晚上，流速0.2ml/min。
8、方法開發（UV檢測器）
樣品特征和zui初的流動相
化合物類型zui初流動相
疏水性化合物10mM醋酸銨或*緩沖液，pH4.5
親水胺，弱酸（等），非質子類（胺，酯，醇等）5%的異丙醇10mM磷酸鈉緩沖液，pH7.0
強酸（羧酸）10mM磷酸鈉緩沖液，pH7.0
如果化合物包含一些官能團，按照質子官能團確定使用下列哪種方法

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疏水性胺：根據zui初流動相得到的結果，請按下列流程
保留時間和異構體選擇性沒有或低異構體選擇性，低保留時間異構體選擇性和保留時間都高高保留時間，無異構體選擇性
pH值或無電荷改進劑的優化。逐漸增加pH值，用異丙醇調整保留時間，
          ↓
檢測另一中無質子改進劑：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇
          ↓
測試低濃度質子改進劑：辛酸1-20mM；己酸或庚酸1-20mM；四乙基胺或四丙基胺1-5mM。pH降低至4，或增加異丙醇。
       ↓
測試另一中無質子改進劑：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇
 
 測試不同的無質子改進劑：異丙醇，乙腈，甲醇，丙醇，乙醇。
        ↓
測試低濃度質子改進劑：辛酸1-20mM；
己酸或庚酸1-20mM；四乙基胺或四丙基胺1-5mM。

親水性胺，弱酸，非質子化合物：根據zui初流動相得到的結果，請按下列流程
保留時間和異構體選擇性沒有或低異構體選擇性，低保留時間異構體選擇性和保留時間都高高保留時間，無異構體選擇性
pH值或無電荷改進劑或緩沖鹽的優化。降低異丙醇的濃度。
         ↓
測試另一中無質子改進劑：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇
         ↓
胺：檢測低濃度質子改進劑：辛酸1-20mM；己酸或庚酸1-20mM；四乙基胺或四丙基胺1-5mM。pH值逐漸減低，增加異丙醇的濃度。
        ↓
測試另一中無質子改進劑：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇
 見疏水性胺的操作流程

強酸（如羧酸）：根據zui初流動相得到的結果，請按下列流程
保留時間和異構體選擇性沒有或低異構體選擇性，低保留時間異構體選擇性和保留時間都高高保留時間，無異構體選擇性
pH值或無電荷改進劑或緩沖鹽的優化。降低pH值，增加緩沖鹽濃度到50-75mM（zui高濃度100mM）
       ↓
試試低濃度（1-5mM）質子改進劑DMOA（N，N-二甲基辛胺）添加異丙醇
 
 
          ↓
檢測不同的無質子改進劑：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇檢測不同的無質子改進劑：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇
         ↓
試試低濃度（1-5mM）質子改進劑DMOA（N，N-二甲基辛胺）

 
AGP方法開發（MS檢測器）
樣品特征和zui初的流動相
化合物類型zui初流動相
疏水性化合物10mM醋酸銨緩沖液，pH4.5
親水胺，弱酸（等），非質子類（胺，酯，醇等）5%異丙醇的10mM醋酸銨緩沖液，pH7.0
強酸（羧酸）10mM醋酸銨緩沖液，pH7.0
如果化合物包含一些官能團，按照質子官能團確定使用下列哪種方法

疏水性胺：根據zui初流動相得到的結果，請按下列流程
保留時間和異構體選擇性異構體選擇性低或沒有，保留時間低異構體選擇性和保留時間都高保留時間高，無異構體選擇性
pH值或無電荷改進劑的優化。逐漸增加pH值，用異丙醇調整保留時間，（濃度越低，選擇性越高）
          ↓
測試另一中無質子改進劑：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇
          ↓
測試低濃度揮發性質子改進劑：TEA（三乙基胺）1-20mMpH降低至4，或增加異丙醇。
       ↓
測試另一中無質子改進劑：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇
 
 測試不同的無質子改進劑：異丙醇，乙腈，甲醇，丙醇，乙醇。
       ↓
測試低濃度揮發性質子改進劑：TEA（三乙基胺）1-20mM

親水性胺，弱酸，非質子化合物：根據zui初流動相得到的結果，請按下列流程
保留時間和異構體選擇性沒有或低異構體選擇性，低保留時間異構體選擇性和保留時間都高高保留時間，無異構體選擇性
pH值或無電荷改進劑或緩沖鹽的優化。降低異丙醇的濃度。
        ↓
測試另一中無質子改進劑：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇
         ↓
胺：檢測低濃度揮發性質子改進劑：TEA（三乙基胺）1-20mMpH值逐漸減低，增加異丙醇的濃度。
       ↓
測試另一中無質子改進劑：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇
 見疏水性胺的操作流程

強酸（如羧酸）：根據zui初流動相得到的結果，請按下列流程
保留時間和異構體選擇性沒有或低異構體選擇性，低保留時間異構體選擇性和保留時間都高高保留時間，無異構體選擇性
pH值或無電荷改進劑或緩沖鹽的優化。降低pH值，增加緩沖鹽濃度到50-75mM（zui高濃度100mM）
         ↓
測試低濃度揮發性質子改進劑添加異丙醇
 
 
       ↓
測試不同的無質子改進劑：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇測試不同的無質子改進劑：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇
 
        ↓
測試低濃度揮發性質子改進劑

9、保護柱的使用
為了保護分析柱不被高親和力和顆粒雜質污染，使用保護柱，且必須定期更換保護柱，否則將影響分析柱的性能，用于生物分析時尤為重要。
CHIRAL-AGP，CHIRAL-CBH，CHIRAL-HSA，均能提供保護柱
10、選擇適當的保護柱
為了優化色譜系統性能，保護柱的內徑必須和分析柱的內徑相匹配，每種色譜柱的保護柱內徑必須和分析柱相匹配，標準的保護柱套CH10.3，適合所有內徑的保護柱芯（2，3和4mm）
文章鏈接：中國化工儀器網 http://www.chem17。。ｃｏｍ/tech_news/Detail/220469.html

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