產(chǎn)品詳情KlenTaq-S 測(cè)序酶是Taq DNA 聚合酶的改造版，為 Taq DNA 聚合酶的大片段，并做了基因突變。本酶具有 5’→3’聚合酶活性，無(wú)5’→3’外切酶活性和 3’→5’外切酶活性。相比普通Taq DNA 聚合酶，KlenTaq-S 測(cè)序酶具有很強(qiáng)的 ddNTP 的滲入能力，因此其適用于終止法 DNA 測(cè)序或焦磷酸解反應(yīng) SNP 分析。
本公司 KlenTaq-S 測(cè)序酶是重組表達(dá)，并經(jīng)多步純化制備的重組蛋白。
活性定義活性單位指在 72℃下， 1×AM PCR Buffer 1，30 min 內(nèi)將 10 nmole dNTP 摻入酸不溶性物質(zhì)所需的酶量。特點(diǎn)
1.尤其適合 ddNTP 等修飾核苷酸的摻入反應(yīng)
2.相比全長(zhǎng) Taq DNA 聚合酶，本酶比活性有所降低
適用范圍
ddNTP 終止法DNA 測(cè)序（一代測(cè)序）
焦磷酸解反應(yīng)延伸法 SNP 分析
質(zhì)量控制
經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)控檢測(cè)，確保該產(chǎn)品具有高的活性和純度。
酶貯存緩沖液
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.5% Nonidet P40, 0.5%Tween20, and 50% glycerol.
應(yīng)用舉例
以下反應(yīng)舉例為 50 μl 標(biāo)準(zhǔn) PCR 體系，僅供參考。實(shí)際 PCR 條件應(yīng)根據(jù)模板、引物、目的片段大小加以?xún)?yōu)化，確定好的反應(yīng)條件。
1） 按下表配制反應(yīng)體系
組份 | 體積/μl | 終濃度 |
10×AM PCR Buffer 1 | 5 | 1× |
dNTPs（2.0 mM） | 5 | 0.2 mM |
引物 F（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
引物R（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
Template | Varable* | / |
KlenTaq-S測(cè)序酶（5U/μl） | 0.5 | 2.5U |
ddH2O | Varable | / |
總體積 | 50 | / |
*模板DNA用量參數(shù)(50 μl反應(yīng)體系):
人基因組DNA100-1000 ng ; 微生物基因組DNA 10-100ng；PCR產(chǎn)物 1 ng-10 ng； Plasmid DNA 5-30 ng ; cDNA from RT reaction 1-5 μl 。
2） 按如下條件進(jìn)行反應(yīng)，
95℃ | 2-5 min | |
95℃ | 15 sec |
25-35 Cycles |
55~72℃ | 20 sec | |
72℃ | 1kb/min | |
72℃ | 5 min |
3） 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)PCR 產(chǎn)物，或按實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行后續(xù)操作。
注意事項(xiàng)1.PCR 條件和野生型 Taq DNA 聚合酶類(lèi)似，對(duì)特定 DNA 的測(cè)序反應(yīng)可能需要優(yōu)化。2.本酶擴(kuò)增能力較野生型 Taq DNA 聚合酶有所降低，PCR 產(chǎn)量有所降低，不建議用于常規(guī) PCR。3.不可用于 Taqman 探針?lè)?/span> q-PCR。 濃度5U/uL運(yùn)輸與保存
-20℃可保存 2 年，避免反復(fù)凍融
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