α酮戊二酸脫氫酶(α-KGDH)測(cè)試盒
測(cè)定方法: 分光光度法
測(cè)定規(guī)格: 50管/48樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個(gè)月
注 意: 正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
α-KGDH(EC 1.2.4.2)廣泛存在于動(dòng)物、植物微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中,是三羧酸循環(huán)調(diào)控關(guān)鍵酶之一,催化 α-酮戊二酸氧化脫羧生成琥珀酰輔酶 A。
測(cè)定原理:
α-KGDH 催化 α-酮戊二酸、NAD+ 和輔酶 A 生成琥珀酰輔酶 A、 二氧化碳和 NADH,NADH 在 340 nm 有特征吸收峰,以 NADH 的生成速率表示 α-KGDH 活性。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:50mL×1瓶,-20℃保存;
試劑二:10mL×1瓶,-20℃保存;
試劑三:1mL×1支,-20℃保存;
試劑四:液體55.5mL×1瓶,4℃保存;
試劑五:粉劑×1支,4℃保存;
試劑六:粉劑×1支,4℃保存;
試劑七:粉劑×1支,4℃保存;
試劑八:粉劑×1支,4℃保存;
試劑九:粉劑×1支,-20℃保存;
試劑十:粉劑×1支,-20℃保存;臨用前加入2.1mL蒸餾水充分混勻待用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
工作液的配制:臨用前把試劑五、試劑六、試劑七、試劑八和試劑九轉(zhuǎn)移到試劑四中混合溶解待用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
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