粒體檸檬酸(MCA)含量測試盒
測定方法: 微量法
測定規格: 100管/96樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個月
注 意: 正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
MCA是線粒體三羧酸循環的 個中間產物,由檸檬酸合酶催化乙酰CoA 與草酰乙酸合成, 其含量是三羧酸循環強度的主要指標之一。配合測定丙酮酸含量、丙酮酸脫氫酶活性、乙酰 CoA 含量、檸檬酸合酶活性和 MCA 含量, 其中(1)丙酮酸含量和丙酮酸脫氫酶活性變化可以反映糖酵解進行程度,(2)綜合分析丙酮酸含量、丙酮酸脫氫酶活性和乙酰 CoA 含量變化可以反映脂肪酸β-氧化途徑提供的乙酰CoA 情況,(3)乙酰 CoA 含量、檸檬酸合酶活性和 MCA 含量變化可以反映三羧酸循環進行狀況。
測定原理:
MCA 在檸檬酸裂解酶的作用下,生成α-酮酸(草酰乙酸);在弱酸性條件下,α-酮酸進一步與苯肼反應,生成相應的α-酮酸苯腙;α-酮酸苯腙在 330nm 處有吸收峰,該波長下吸光度的變化程度可反映出 MCA 的含量。自備儀器和用品:
分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調式移液槍、微量石英比色皿/96 孔板(UV 板)、研缽、蒸餾水。線粒體中檸檬酸提取:
稱0.05~0.1g樣品(建議稱0.1g樣本),加入0.5mL酸性提取液,冰上充分研磨,600g/min 4℃離心5min;取上清至另一EP管中,11000g/min 4℃離心10min,棄上清(取300μL該上清液和300μL堿性提取液中和后可用于細胞質CA含量測定);沉淀即線粒體,向沉淀中加入0.5mL酸性提取液,充分懸浮溶解,超聲波破碎(功率20%,超聲3秒,間隔10秒,重復30次),取此溶液300μL和300μL堿性提取液中和,混勻,置冰上待測(不可用于蛋白質含量測定)。
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