乙酰(Acetyl-CoA)測(cè)試盒
測(cè)定方法: 微量法
測(cè)定規(guī)格: 100管/96樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個(gè)月
注 意: 正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
乙酰廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中。是生物體能源物質(zhì)代謝過(guò)程中產(chǎn)生的一種重要的中間代謝產(chǎn)物。在體內(nèi)能源物質(zhì)代謝中是一個(gè)樞紐性的物質(zhì)。糖、脂肪、蛋白質(zhì)三大營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)通過(guò)乙酰匯聚成一條共同的代謝通路-三羧酸循環(huán)和氧化磷酸化,經(jīng)過(guò)這條通路 氧化生成二氧化碳和水,釋放能量用于ATP合成。此外,乙酰是合成脂肪酸,酮體,及其衍生物等生理活性物質(zhì)的前體物質(zhì)。測(cè)定原理:
蘋果酸脫氫酶可催化蘋果酸和NAD生成草酰乙酸和NADH。檸檬酸合酶可催化乙酰和草酰乙酸生成檸檬酸和。利用蘋果酸脫氫酶和檸檬酸合酶的偶聯(lián)反應(yīng),乙酰含量和NADH的生成速率成正比,340nm下吸光值的上升速率反應(yīng)了乙酰含量的高低。需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。樣本的前處理：
1、或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
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