毛細管電泳分析對進樣技術有哪些要求?
電泳儀:為電泳提供外部電場而設計的直流電源。輸出電壓或電流或功率要求相對穩定或按特定規則變化。常用的電泳分析方法主要有:醋酸纖維素膜電泳、凝膠電泳、等電聚焦電泳、二維電泳、毛細管電泳。其中,毛細管電泳分析對采樣技術的要求非常高,采樣操作如下:
1、注射區越小越好:
無論采用何種進樣方式,毛細管插入樣品溶液的深度一般都小于毛細管總長度的1%~2%,以盡量減少樣品溶液通過毛細管吸附進入毛細管影響性能的注射量。樣品管中的溶液至少為5μL,進樣量為1-50nL。
2、注射時間盡量短:
通常注射時間為0.5~1s。此時,附著在毛細管上的樣品量相對于吸入量可以忽略不計。
雖然毛細管電泳的進樣時間可以達到±0.1s,但毛細管插入樣品管時不可避免地會有一些溶液粘附。過短的進樣時間會影響分析的重復性。
3. 樣品預濃縮:
受毛細管總體積的限制,毛細管電泳不能像HPLC那樣增加進樣量來提高檢測靈敏度,但可以采取一些措施來提高它的濃度。
*當樣品緩沖液的電導率明顯低于電泳緩沖液的電導率(100倍以上)時,在毛細管兩端施加電壓使分子在樣品區前后形成較大的電場在樣品溶液中遷移速度更快。當這些分子到達電泳緩沖液的邊界時,由于電場減弱,遷移速度減慢,使樣品區變窄,增加濃度,達到濃縮的目的。
* 當樣品緩沖液和電極緩沖液的電導率相同,且樣品濃度較稀,不適合進一步稀釋時,可以在進樣前吸入一些水,以達到濃縮的目的。
無論采用何種進樣方法,上述方法都可以使樣品積累和濃縮。但是,由于聚集區電位的急劇下降,該區的溫度會升高。
4、毛細管插入樣品溶液后,應立即開始取樣操作,完成后迅速移至緩沖液中開始電泳。否則,會發生毛細管作用和虹吸作用,導致誤差和譜帶變寬。
5、電極不要與毛細管接觸,樣品池和緩沖池液面高度要平衡。
6. 保持系統盡可能恒定。因為溫度直接影響粘度,它影響恒定的注射量。
7、樣品溶液中的溶劑必須與緩沖液混溶,前者的離子強度應低于后者。
8. 防止樣品溶液和緩沖液的蒸發和損失。