在光學顯微鏡的發(fā)展過程中，相差鏡檢法的發(fā)明成功，是近代顯微鏡技術中的重要成就。我們知道，人眼只能區(qū)分光波的波長（顏色）和振幅（亮度）。對于無色透明的生物標本，當光線通過時，波長和振幅變化不大，在明場觀察時很難觀察到標本。

相差顯微鏡利用被檢物體的光程之差進行鏡檢，也就是有效的利用光的干涉現象，將人眼不可分辨的相位差變?yōu)榭煞直娴恼穹睿词故菬o色透明的物質也可成為清晰可見。這大大便利了活體細胞的觀察，因此相差鏡檢法廣泛應用于倒置顯微鏡。

相差圖像

相差顯微鏡的基本原理是，把透過標本的可見光的光程差變成振幅差，從而提高了各種結構間的對比度，使各種結構變得清晰可見。光線透過標本后發(fā)生折射，偏離了原來的光路，同時被延遲了1/4λ（波長），如果再增加或減少1/4λ，則光程差變?yōu)?/2λ，兩束光合軸后干涉加強，振幅增大或減小，提高反差。在構造上，相差顯微鏡又不同于普通光學顯微鏡，具有兩個特殊之處：

（1）環(huán)形光闌（annular diaphragm）位于光源與聚光器之間，作用是使透過聚光器的光線形成空心光錐，焦聚到標本上。

（2）相位板（annular phaseplate）在物鏡中加了涂有氟化鎂的相位板，可將直射光或衍射光的相位推遲1/4λ。分為兩種：

①A+相板：將直射光推遲1/4λ，兩組光波合軸后光波相加，振幅加大，標本結構比周圍介質更加明亮，形成亮反差（或稱負反差）。

②B+相板：將衍射光推遲1/4λ，兩組光波合軸后光波相減，振幅變小，形成暗反差（或稱正反差），結構比周圍介質更暗。

相差原理

轉載自： 顯微鏡的八種觀察方式—相差鏡檢法 /info/1543/