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PCR的技術(shù)步驟

2022年06月16日 17:32:44      來源：化工儀器網(wǎng) >> 進(jìn)入該公司展臺      閱讀量：928

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PCR即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase chain reaction）的縮寫，它是體外酶促合成特異（DNA）片段的方法。這一方法的要點(diǎn)是合成兩個分別互補(bǔ)于待擴(kuò)增（DNA）片段兩端的小片段引物，在含有引物、待擴(kuò)增DNA模板核苷酸底物和DNA多聚酶的反應(yīng)體系中DNA復(fù)制反復(fù)進(jìn)行，在短時間內(nèi)可以取得大量擴(kuò)增產(chǎn)物。其原理是寡聚核苷酸鏈引物在DNA聚合酶的作用下沿模板延伸，合成兩個與靶DNA兩側(cè)序列互補(bǔ)的引物，在體外進(jìn)行靶DNA的重復(fù)合成。

主要的技術(shù)步驟是：
（1）DNA變性 加熱使靶DNA序列雙鏈解離成單鏈DNA。
（2）引物與靶DNA退火 適當(dāng)降低溫度，使兩個引物分別結(jié)合成靶DNA兩條的3′末端向5′末端延伸。
（3）引物延伸 在DNA聚合酶的催化下，引物沿著靶DNA3′末端向5′末端延伸。新合成的DNA鏈在變性解離后，又可作為模板與引物雜交，并且在DNA聚合酶的催化下，引導(dǎo)合成新的靶DNA鏈。如此反復(fù)進(jìn)行以上3個步驟，即可使靶（DNA）片段指數(shù)性擴(kuò)增。

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