關(guān)于組織結(jié)構(gòu)的體積;在冰凍固定時(shí)，要求體視顯微鏡所分析的組織或細(xì)胞在極短的時(shí)間由37℃降至一80℃以下。因此組織塊不能像在制備超薄切片標(biāo)本，特別是為戊二醛固定所要求的那種大小一般來(lái)說(shuō)，徠卡顯微鏡的人們用分散的細(xì)胞(如血細(xì)胞)，或體視顯微鏡分離的細(xì)胞(如心肌細(xì)胞)或培養(yǎng)細(xì)胞。舉例如下，日人鈴木研究骨骼肌收縮與舒張時(shí)C8a 在質(zhì)網(wǎng)中的釋放與攝取過(guò)程以及Cat十在肌質(zhì)網(wǎng)中的流動(dòng)途徑，他分離蛙胖腸肌單根肌纖維(即骼肌細(xì)胞)，給予電刺激后在不同時(shí)相將其冰凍固定。體視顯微鏡當(dāng)然也可以將組織塊直接冰凍固定，但體積要相當(dāng)小，保證組織塊中大部分細(xì)胞(主要是四周的細(xì)胞)能保存好而無(wú)冰晶形成。

一個(gè)非常重要的問(wèn)題是在取材和分離細(xì)胞過(guò)程中必須十分仔細(xì)，體視顯微鏡絕不能損傷待觀察分析的細(xì)胞。

因?yàn)樽鱔線徽區(qū)分析不但步驟繁多，奧林巴斯顯微鏡而且成本甚高，如果經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間及多步驟的處理后，所分析的細(xì)胞是受損傷的細(xì)胞或死細(xì)胞，體視顯微鏡得出錯(cuò)誤的結(jié)論是非常遺憾的.如經(jīng)過(guò)膠元酶處理分離出的心肌細(xì)胞有兩種形態(tài)，一種是長(zhǎng)桿狀，排斥臺(tái)盼藍(lán);一種是圓形，用臺(tái)盼藍(lán)染色時(shí)著藍(lán)色.后者是在細(xì)胞分離過(guò)程中受損傷的瀕死細(xì)胞。這體視顯微鏡兩種細(xì)胞中電解質(zhì)的含量及分布十分不同。

圓形心肌細(xì)胞中Na 甚高而K 極低，線粒體中的Caz十濃度十分高(25Ummol/kgdryweight),經(jīng)過(guò)與其它分析方法核對(duì)，證明圓形細(xì)胞高Na 低K 及線粒體內(nèi)高Ca2 是由于在細(xì)胞分離過(guò)程中細(xì)胞膜受損傷的結(jié)果。

　　
體視顯微鏡細(xì)胞及組織的冰凍固定方法往往是先采取碎冷固定(quench-freeze)，然后放入液氮中保存。碎冷固定對(duì)于保存的效果十分重要。體視顯微鏡活細(xì)胞或新鮮組織中富含水分，偏光顯微鏡當(dāng)淬冷時(shí)往往是細(xì)胞或組織與碎冷劑(特別是用液氮碎冷時(shí))直接接觸的部位先冷凍固定，因而形成一個(gè)“殼”，體視顯微鏡便妨礙了細(xì)胞的中心部位碎冷固定。因此體視顯微鏡在作X-線微區(qū)分析時(shí)，常常發(fā)現(xiàn)較大的細(xì)胞的中心部位有冰晶存在。