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1、4%多聚甲醛常規(guī)灌注固定，取材并置20%蔗糖溶液（4℃）過夜，蠟塊制作，切片，貼片。0.01M PBS清洗5min×3次;

2、脫蠟、水化：用二甲苯兩次10min，用梯度乙醇由低濃度到高濃度進行水化;

3、加入0.3%的*甲醇溶液（甲醇80ml+0.01M PBS 100ml+30%*）30min，以消除內源性過氧化物酶的影響，0.01M PBS清洗5min×3次;

4、加入0.3% Triton X-100（0.3ml Triton X-100+0.01 M PBS 100ml）30min，以增加細胞的通透性，0.01M PBS清洗5min×3次;

5、加入用血清稀釋液（牛血清白蛋白1.00g+0.01M PBS 100ml+疊氮納0.08g）稀釋的一抗，4℃存放24-48h。吸去抗體，0.01M PBS洗5min×3次;

6、加入0.01M PBS稀釋的的二抗，室溫孵育2h。0.01M PBS洗5min×3次;

7、加入ABC復合物之類的抗體，室溫孵育2h，0.01M PBS洗5min×3次;蒸餾水迅速沖三次;

8、加入顯色液，進行免疫組織化學顯色，時間一般3~10min，可不時在顯微鏡下進行觀察，待細胞著色而背底顏色較淡時馬上吸去顯色液，用蒸餾水迅速沖三次后加入0.01M PBS終止反應;

9、蘇木素復染;

10、梯度酒精脫水之后，透明，封片，拍照。