游離脂肪酸（NEFA）測試盒

一．試劑盒說明

游離脂肪酸能與銅離子結合形成脂肪酸的銅鹽而溶于氯仿中，其含量與游離脂肪酸含量成正比。用銅試

劑測定其中銅離子的含量，即可推算出游離脂肪酸的含量。 注意：此實驗必須用玻璃試管，不能用半自動及比色。

二．試劑盒組份

詳情咨詢客服人員

注意：

1.試劑三：臨用時以甲液：乙液：丙液=10:9:1 混合配成銅試劑，需多少配多少，配好后 4℃保存二周。

2.試劑五：1000μmol/L 棕櫚酸標準品的配制：將一支粉劑用溶劑溶解后定容至 20ml，混勻.（注意需用溶劑 將裝粉劑的小離心管洗凈）

三．操作步驟

附：詳細操作步驟：

1、 充分混勻準確抽提 2 分鐘（用秒表計時）。如果您沒有磨口試管，可用普通玻璃試管代替，但必須用保 鮮薄膜封口，以便防止液體會發及濺出。

2、 抽提完后以 3500 轉/分，離心 10 分鐘，若發現下層液體呈半凝固狀態、凝固層較厚或下層液體不足 2ml

時，則可用小玻棒或移液器吸嘴輕輕攪拌后再次離心，直至分層清楚。

3、 然后用注射器接上硬膜外套吸取上層液體及凝固層并棄之。

4、 另取一個注射器及硬膜外心針套，將硬膜外心插入針套中，小心插入下層抽提液中，拔出 針心，接上注射器吸取下層抽提液 2.3ml-2.5ml 至另一試管中。（這樣可避免上層液體及凝固層混入下層 液體中，若混入上層液體及凝固層，則需要重新離心后再去下層抽提液，否則會影響結果。）若偶然發現 抽提液有霧狀混濁，可放入 37℃水浴 1-2 分鐘即可。

5、 再從上述試管中用玻璃移液管準確吸取 2ml 下層抽提液加入另一試管中，加顯色劑進行顯色。

6、 比色皿在用雙蒸水沖洗干凈后，還必須用無水乙醇沖洗，然后加試劑一調零，否則加入的試劑一中會混 有水珠（試劑一和水不互溶）。

7、 操作工程中只能用玻璃管，不能用熟料材質的試管代替。 以上七點為實驗成敗的關鍵。

四．計算公式及舉例

詳情咨詢客服人員

五．注意事項

1.實驗必須用玻璃管和普通分光光度比色，不可用熟料事關和半自動及比色（有機溶 劑對半自動及會有損壞）。

2.顯色前吸取下層抽提液時，習慣不要觸及管壁，以免沾染管壁上粘著的銅試劑。下層抽提液必須清澈， 否則會使結果偏高。

3.可被試劑一抽提而干擾比色，故黃疸血清須做一對照管，即zui后不加顯色劑而用正丁醇代替， 在測定管光密度讀數中減去此對照管的光密度讀數。

附錄：實驗中可能出現的問題

在做脂肪酸的時候空白很高，也有的老師操作結果中標準和測定結果都很高，甚至能達到 3.000 以上， 大多數情況下是由于操作問題引起的，下面是關于 NEFA 實驗所要注意的幾個問題：

1. 在做組織樣本的時候，不能將樣本一起做成勻漿，因為組織在做成勻漿后，很多指標含量都會快速 下降，一般應該是上午做好勻漿，下午就要測定完，樣本太多一次不能操作完的，當天能做幾個樣本就 做幾個勻漿，是按分組取樣，每組均要樣本參與，這樣能減少批間差。

2. 關于移液槍的使用，建議剛做實驗的老師，用倒退法加樣，以便減少誤差。并且在實驗前能夠 多加練習，如反復蒸餾水，當加樣熟練后，可進一步用無水乙醇和血清進行練習，這樣可以提高加樣的 準確性。

3.   在 NEFA 的混勻過程中，用橡皮塞塞住試管后，按住試管上部混勻。切忌握住試管中部或者下 部，因為這樣會使混勻不充分，導致抽提不充分。

4. 實驗時所用器皿應當仔細洗刷并且烘干，如果有污染，則可能會對實驗造成不必要的損失。例如： 在配制銅試劑時，燒杯不干凈，則可能導致配制出的銅試劑混濁，而非澄清透亮。如果在實驗過程中試 管不干凈，也可能引入雜蛋白，甚至造成空白管也能出現中間蛋白層的現象。

5. 試劑配制時應按照說明書的順序進行。例如：在銅試劑配制時，如果按照打亂順序配制，即不按照 甲乙丙的順序，那么也有可能會使配制好的銅試劑出現渾濁現象，從而不能使用。

6. 實驗時的自備試劑不能有污染，特別是蒸餾水，很多實驗失敗都是因為zui容易忽略的蒸餾水受到了 污染，引入雜離子或者雜蛋白。

7.   離心后的上層銅試劑建議客戶用一次性注射器吸出。在吸下層抽提液時，應該用適當大小的穿刺針， 如果穿刺針過大，例如用牛的穿刺針，有可能攜帶過多的上層銅試劑或者中間的蛋白層，如果吸到上層 的銅試劑，在比色中會使吸光度特別高，一起結果偏差很大，并且做不同試驗時所用的穿刺針不應交叉 使用，每隔實驗所用的玻璃移液管或者穿刺針能夠固定不變。

8. 在比色過程中，應保證分光光度計使用恰當無誤。比方說有的老師再調零時，只用一個比色皿調零， 另一個比色皿有沖洗和調零就直接使用，會造成初始值就偏高的現象，因為比色皿會吸附顏色。

9. 在配制試劑過程中，能夠嚴格按照我們說明書上的量進行準確量取，以加強實驗的準確性，不 能隨便倒取。