材料和方法 

病例的一般資料收集 2016 年 8 月-2018 年 8 月蚌埠醫學院附屬醫院血液內科經細胞學、免疫學、細胞遺傳學、分子生物學（MICM）確診的初發急性髓系白血病患者 108 例，其中男 61 例，女 47 例；中位年齡55（13-79）歲。依據 FAB 分型標準：除去 1 例急性混合細胞白血病，其余 AML-M1 8 例，AML-M245 例，AML-M3 10 例，AML-M4 18 例，AML-M5 25 例，M6 1 例。

試劑與儀器 

DNA 提取試劑盒為上海源奇生物醫藥科技生物公司產品；引物合成為生工生物工程有限公司產品；PCR 試劑盒為日本 TaKaRa 公司產品；瓊脂糖為上海百研生物科技公司產品；TAE 為廣州賽國生物科技公司產品；溴化乙錠為江蘇凱基生物公司產品。低溫高速離心機為美國 Thermo 科技公司產品；LX-400 迷你離心機為海門市其林貝爾儀器制造有限公司產品；酶標儀為美國 BioTek 儀器有限公司；PCR 儀為美國 Applied Biosystems 公司產品；水平式凝膠電泳槽及電泳儀均為上海 Tanon科技公司產品；全自動凝膠成像系統為上海 Tanon科技公司產品。基因組 DNA 的制備按照 DNA 抽提試劑盒說明書要求（上海源奇生物醫藥科技有限公司）提取基因組DNA，測定吸光度，所有用于PCR的DNA樣本的OD260/280比值均＞ 1.8，去離子水稀釋基因組 DNA 樣品至 50-150 ng/μl。目的基因的 PCR 擴增根據 GenBank 上目標基因序列，由生工生物工程（上海）股份有限公司合成：正義鏈：5′-GACTGAGTACAAACTGGTGG-3′，反義鏈：5′-TGCATAACTGAATGTATACCC-3′，擴增產物長度 250bp；PCR 擴增的反應體系 50 μl：10×PCR buffer（Mg2+）5 μl + dNTP Mixture 4 μl + 引物 F 0.5 μl+ 引物 R 0.5 μl + Tap 酶 0.25 μl + DNA 標本 2 μl，去離子水補足體積（PCR 試劑盒來自寶日醫生物技術有限公司）。

結 果

NRAS 基因 PCR 擴增產物瓊脂糖凝膠電泳結果及基因測序圖列于圖 1、圖 2。108 例 AML 患者中發現，11 例有 NRAS 突變，其中 G12D 6 例、G13D 3例、G61K 2 例，突變率為 10.2%。108 例 AML 患者中 105 例有完整核型分析資料。10 例 NRAS 突變患者擁有可供分析的染色體核型，其中 4 例為正常核型，故其在正常核型中的突變率為 7.84%，與未突變組比較無明顯差異（P＞ 0.05）。細胞遺傳學高危、中危、低危患者分別 為 1 例、6 例 和 3 例， 所 占 比 分 別 為 12.5%、10.17%、4.55%。3 組間的統計學分析亦無明顯差異（P＞ 0.05）。

討 論 

NRAS 基因編碼是一種 21KD 的膜蛋白，其作為一種“分子開關”，位于細胞膜表面，可以將細胞外的信號轉至細胞核，從而調節細胞的增殖、分化和凋亡 。而 NRAS 突變主要是集中在外顯子 1、2 處涉及 12、13、61 密碼子的錯義突變，其作為目前的致人 AML 的 2 類合作突變中的Ⅰ類突變，賦予細胞增殖和生存優勢，從而參與 AML的發生發展。

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