一、微生物李斯特菌檢測板產品介紹
1、微生物李斯特菌檢測板原理及適用范圍
李斯特菌檢測板是一種預先制備好的一次性培養基產品，含有標準的營養培養基，選擇性試劑，冷水可溶性吸水凝膠和β-D-葡萄糖苷酶(β-D-glucosidase)的顯色底物( X-GLU )，適用于檢測或者計數食品及環境樣品中的李斯特菌菌數。李斯特菌檢測板檢測的李斯特菌包括單核細胞增生李斯特菌(Listeria.monocytogenes )，英諾克李斯特菌(Listeria.innocua)，威氏李斯特菌(Listeria.welshi)，但不能區分各種菌。
2、操作方法
2.1 食品樣品檢測
2.1.1 食品樣品處理：取樣品25 g(mL)放入裝有225 mL滅菌磷酸鹽緩沖液（或生理鹽水）的取樣罐或均質袋內，制成1:10的樣品勻液。根據樣品污染程度及檢驗需要，可進一步制成10倍遞增的樣品稀釋液，選擇2～3 個適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液）來進行接種。
2.2 環境樣品檢測
2.2.1 環境樣品采集：用無菌的涂抹棒或其他采樣設備收集環境樣品。濕潤采樣設備液體體積≤10 mL。濕潤劑可以為無菌水，滅菌生理鹽水（磷酸鹽緩沖液）或者緩沖蛋白胨水。
2.2.2 環境樣品處理：在收集的環境樣品中添加10 mL 滅菌生理鹽水（或磷酸鹽緩沖液），充分混勻。根據樣品污染程度及檢驗需要，可進一步制成10倍遞增的樣品稀釋液，選擇2～3 個適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液）來進行接種。
2.3 接種：將李斯特菌檢測板上層膜不干膠標簽部分揭開，用無菌吸管吸取1mL樣品勻液均勻滴加到紙片上，迅速貼好上層膜并水平晃動檢測板，靜置10 s左右，待樣品勻液被吸附在濾紙上。每個稀釋度接種兩個檢測板作為重復。
2.4 培養：將檢測板疊在一起，倒置于36℃±1℃恒溫培養箱內，培養18～24h。
3、結果判讀
在檢測板上生長的藍綠色點即為李斯特菌陽性點，若檢測板上無菌生長或者長出點為其他顏色點即為李斯特菌陰性。
4、計數原則及報告方式
4.1 樣品計數
4.1.1 以生長有30～300CFU的檢測板為計數適宜范圍。
4.1.2 若只有一個稀釋度檢測板上的菌落數在計數合適范圍30～300CFU之間，則計算兩個檢測板菌落數的平均值，再除以相應的稀釋倍數，作為每克（毫升）中菌落總數結果。
4.1.3 若有兩個連續稀釋度在適宜計數范圍內時，按式（1）計算：
∑C
N= ———————— •••••••••••••••••••（1）
（n1+0.1n2）d
式中：
N——樣品中李斯特菌菌落數；
∑C——兩個連續稀釋度檢測板（含適宜范圍菌落數的檢測板）李斯特菌落數之和；
n1——適宜范圍菌落數的個稀釋度（低）檢測板個數；
n2——適宜范圍菌落數的第二個稀釋度（高）檢測板個數；
d——稀釋度的稀釋倍數
示例：
稀釋度 | 1:10（個稀釋度） | 1:100（第二個稀釋度） |
菌落數 | 245，247 | 31，30 |
（245+247+31+30）
N= ———————— =2514
（2+0.1×2）×10-1
結果表述為2.5×103CFU/g(mL)。
4.1.4 若所有稀釋度檢測板上均無菌落生長，則以小于1/d（d—低稀釋倍數）計算。
4.1.5 低數值的估算：如果實驗樣品原液（水及液體飲料）或初始稀釋懸液（其他樣品）的兩個檢測板上的菌落數均小于30CFU，計算兩個檢測板上的菌落數的平均數。計算式（2）：
∑C
NE = —— •••••••••••••••••••（2）
nd
式中：
NE——每毫升或每克樣品中菌數的估算值；
∑C——兩個檢測板上菌落數的和；
n——檢測板的數量；
d——樣品初始懸液或實際接種懸液的稀釋倍數。
4.1.6 大數值的估算：若所有稀釋度的檢測板上菌落數均大于300CFU，計數接近300CFU的檢測板上的菌落并計算出平均數，其他檢測板可記錄為多不可計。結果計算式（3）：
∑C
NE = —— •••••••••••••••••••（3）
nd
式中：
NE——每毫升或每克樣品中菌數的估算值；
∑C——兩個檢測板上菌落數之和；
n——檢測板的數量；
d——與樣品懸液相的稀釋倍數。
5、結果報告
固體樣品以CFU/g為單位報告，液體樣品以CFU/mL為單位報告。
6、附加說明
注意使用過的檢測板上帶有活菌，需及時按照生物安全廢棄物處理原則進行處理。
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