丙酮酸羧化酶(PC)測試盒
測定方法: 微量法
測定規格: 100管/96樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個月
注 意: 正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
丙酮酸羧化酶(pyruvate carboxylase,PC,EC 6.4.1.1)廣泛存在于動物、霉菌和酵母的線粒體中,催化丙酮酸、ATP、CO2和水生成草酰乙酸、ADP和Pi,是糖異生過程的 個限速酶,在保證的動態平衡方面起著重要的作用。
測定原理:
PC催化丙酮酸、ATP、CO2和水生成草酰乙酸、ADP和Pi,蘋果酸脫氫酶進一步催化草酰乙酸和NADH生成蘋果酸和NAD+,在340nm下測定NADH氧化速率,即可反映PC活性。
需自備的儀器和用品:
分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣本的前處理:
組織、或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:
1、稱取約0.1g組織或收集500萬或細胞,加入1mL提取液,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
2、將勻漿600g,4℃離心5min。
3、棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g,4℃離心10min。
4、上清液即胞漿提取物,可用于測定從線粒體泄漏的PC(此步可選做)。
5、在步驟④的沉淀中加入1mL提取液,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3秒,間隔10秒,重復30次),用于線粒體PC活性測定。
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