測(cè)定方法: 微量法
測(cè)定規(guī)格: 100管/48樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個(gè)月
注 意: 正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
GPT(EC 2.6.1.2)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,催化氨基酸和酮酸轉(zhuǎn)氨基反應(yīng),在氨基酸代謝中具有重要作用。此外,哺乳動(dòng)物肝細(xì)胞GPT活性很高,GPT釋放到血液中,血清GPT活性顯著增高。測(cè)定原理
GPT催化和α-酮戊二酸發(fā)生轉(zhuǎn)氨基反應(yīng),生成丙酮酸和;加入2,肼溶液,不僅終止上述反應(yīng),而且與酮酸中的羰基加成,生成丙酮酸苯腙;苯腙在堿性條件下呈紅棕色,可以在505nm讀取吸光值并計(jì)算酶活力。
試驗(yàn)中所需的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。樣品測(cè)定的準(zhǔn)備
1、細(xì)胞或組織樣品的制備:或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
2、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。
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