測定方法: 微量法
測定規格: 100管/48樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個月
注 意: 正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的NADH經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成ATP的同時,形成大量的ROS,同時NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和TCA循環的強弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環。另外,NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。
測定原理:
分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH,NADH通過PMS的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在570nm下檢測吸光值;而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH,進一步采用MTT還原法檢測。需自備的儀器和用品:
酶標儀、臺式離心機、移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
注意事項:
1、如果一次性測定樣本數較多,可將試劑一、二、三和四按比例配成混合液。
2、對照管和測定管的測定步驟的區別:對照管加完試劑一、二、三、四和五后必須馬上加試劑六;測定管
加完試劑一、二、三、四和五后必須反應20min后再加試劑六。
3、反應過程中注意避光。
4、若NAD+測定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH測定中△A(A2-A1)≤0.0222,說明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測限,可做如下調整:(1)將測定管避光靜置時間20min延長到60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取0.2g樣本或0.2mL樣本加入1mL提取液。
5、由于每一個測定管需要設一個對照管,本試劑盒100管保證測48個NAD+或NADH.
所有評論僅代表網友意見，與本站立場無關。