測定方法: 分光光度法
測定規(guī)格: 50管/24樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個月
注 意 : 正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(huán)(TCA)的主要氫受體,生成的 NADH 經(jīng)呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧, 在合成 ATP 的同時,形成大量的 ROS,同時NADH 再生為 NAD+。糖、脂、蛋白質(zhì)三大代謝物質(zhì)分解中的氧化反應(yīng)絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和 NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和 TCA 循環(huán)的強弱。較高的 NAD(H)及 NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態(tài)。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和 TCA 循環(huán)。另外,NAD+降解產(chǎn)物對細胞信號傳導(dǎo)、代謝和基因表達等具有重要的調(diào)控作用。
測定原理:
分別用酸性和堿性提取液提取樣品中 NAD+和 NADH,NADH 通過 PMS 的遞氫作用,還原
氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在 570nm 下檢測吸光值;而 NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH,進一步采用 MTT 還原法檢測。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、臺式離心機、移液器、1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
酸性提取液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存； 堿性提取液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存； 試劑一：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體 4 mL×1 瓶，4℃保存；
試劑三：粉劑×1 瓶，-20 ℃保存，用時加入 4mL 蒸餾水，混勻，用不完的試劑 4℃保存一周；
試劑四：粉劑×1 瓶，4 ℃保存，用時加入 4mL 蒸餾水，混勻，用不完的試劑 4℃保存一周；
試劑五：液體 1.8mL×1 支，4 ℃保存；
試劑六：液體 30mL×1 瓶，4 ℃保存；
試劑七：液體 50mL×1 瓶，4 ℃保存。
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