接種工具與試管菌種的接種操作

（一）接種工具

常用的接種工具有接種針、接種鉤和接種環。對針、鉤和環的要求是能在火焰上燒灼時很易燒紅，而離開火焰后又能很快地冷卻。用白金絲，但價格昂貴，現在都用電爐絲代替。接種環的內徑約2mm，環面應平坦

（二）接種準備工作

如果在接種室操作，接種室應經常打掃，用煤酚皂液擦洗桌面及墻壁，用甲醛熏蒸。接種前應打開無菌室紫外燈滅菌半小時。接種操作人員進入接種室前，應先做好個人衛生工作，換工作鞋，穿無菌工作衣，戴口罩（工作衣、口罩、工作鞋只準在接種室內使用，不準穿著到其他地方去，并定期換洗和消毒滅菌）；在超凈工作臺上進行（般適用于斜面試管、三角瓶種子的接種），先用75%的酒精溶液擦凈工作臺面，開啟超凈工作臺10min后即可接種。對接種的試管、角瓶等應做好標記，注明菌種名稱，接種日期或培養基名稱等。

（三）試管菌種的接種操作

試管菌種的接種是將試管原菌在無菌的條件下移接至另試管培養基上。試管接種中原菌的純粹與否，是生產實踐中的一個極重要的關鍵，因此必須掌握好試管菌種的接種技術。進行接種時，手用肥皂洗浄，再用75%酒精擦手，或新潔爾滅溶液消毒。

擴大移接三角瓶固體培養基、三角瓶液體培養基或試管液體培養基等，接種原理相同，操作方法也基本一致。接種操作簡單，多練習幾遍即能掌握。接種工作非常關鍵，因為污染雜菌，多發生在這個過程。

六、菌種的保藏

（1）斜面菌種保藏法將已長好的斜面菌種，置于4℃C左右的冰箱中保藏。一般可保存2~3個月，長則半年。每隔一定時間進行移接培養菌種。

（2）礦油保藏法適用于嫌氣性細菌，不適宜于酵母菌，更不適宜霉菌。將已滅菌的液體石蠟，在無菌操作下，注入已長好的斜面菌種試管里，油層高于菌種斜面1cm。最后密封管口，置于室溫或冰箱內保藏，保藏時間為1~2年。

（3）沙土管保藏法將沙子用水洗凈，烘干，過60目篩。另外采凈土（距地面33cm以下），曬千，磨細，用120目篩子過篩。以60%沙與40%土相混，每小試管裝上述混合士1g。充分滅菌后，每管加孢子懸浮液幾滴。封口前放于干燥器內真空干燥。

（4）冷凍保藏法在這類保藏中，幾乎利用了一切有利于保藏的因素，故是目前一類綜合性保藏方法。保藏時間為5~15年，適合于各大類菌種保藏