91154Irvine化學成分限定的T細胞培養基現貨

訂購信息

產品特點

1. 無血清成分

2. 無異種蛋白

3. 化學成分明確

4. 不需要額外添加血清或者白蛋白，支持T細胞體外活化及擴增培養；

5. T細胞（CAR-T）培養性能明顯優于市面上的無血清培養基；

6. GMP條件下生產以及DMF備案

歡迎您致電 重慶市華雅干細胞技術有限公司 199 2296 8205   Q 3054606584

華雅干細胞-客服中心：4000212020

91154Irvine化學成分限定的T細胞培養基現貨提供性能

1. 在平板、細胞培養袋和G-Rex中支持活躍的T細胞生長，同時維護其功能

2. 提供批量到批次的性。

3. 消除未定義成分對T細胞表型的影響

4. 支持目標T細胞類型(如Th)的極化1T調節細胞

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存儲說明和穩定性

使用無菌技術處理以避免污染。 儲存在2-8oC，避光，直到準備使用。 該產品在原始包裝下在2-8oC下穩定，從1L PET瓶制造之日起14個月。 打開后，產品應在2-8oC的黑暗中儲存，并在4周內使用。 請勿在的到期日后使用。 未經驗證可在超過未開封的保質期內使用。

使用說明

制備用于T細胞活化的平板

1. 用濃度為1μg/ mL的抗人CD3（克隆UCHT1）和抗人CD28（克隆CD28.2）抗體在37℃oC下涂覆2小時或在2-8℃下過夜oC用Parafilm®來防止蒸發。

2. 吸出涂層溶液。

3. 在加入細胞之前用PBS洗滌兩次。

制備T細胞

1. 在使用前，在37oC下平衡足夠量的PRIME-XV T細胞CDM至少15分鐘。

2. 通過在37oC水浴中溫和攪拌小瓶1分鐘，解凍新鮮的冷凍保存的PBMC小瓶。

3. 小心地將小瓶的全部內容物轉移到含有預熱的10mL PRIME-XV T Cell CDM的15mL錐形管中。

4. 將細胞以200g旋轉10分鐘。

5. 小心吸出上清液，留下覆蓋細胞沉淀的小體積的培養基。

6. 補充PRIME-XV T細胞CDM，相當于200 U / mL（11,000 IU / mL）的IL-2。

7. 用補充的PRIME-XV T細胞CDM重懸細胞沉淀，并將細胞以100,000細胞/ mL的密度轉移到包被的平板上。

8. 將細胞在37℃oC和5％CO 孵育。

9. 每2至3天培養，用含有相當于200U / mL（11,000IU / mL）IL-2的PRIME-XV T細胞CDM進食。 飼料量應至少為原始培養體積的70％。

注意：應根據細胞密度和生長情況調整攝食事件和體積的頻率，以避免過度融合。

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收獲T細胞

1. 使用細胞刮刀輕輕地從培養皿中取出T細胞。

2. 用溫度平衡的PRIME-XV T Cell CDM洗滌。

3. 細胞準備好進行分析，存儲或重新種植。

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G-Rex 6孔培養板中T細胞擴增的方案

第0天：T細胞的電鍍和活化

1. 在使用前，在37℃下平衡足夠量的PRIME-XV T Cell CDM至少15分鐘。注意：為避免溫度循環，請確定平衡前所需的總體積。

2. 將小瓶在37°C水浴中輕輕攪拌1分鐘，解凍1小瓶冷凍細胞。 或者，使用新鮮分離或收獲的細胞。

3. 小心地將小瓶的全部內容物轉移到含有10mL PRIME-XV T Cell CDM的15mL錐形管中。

4. 將細胞以200g旋轉10分鐘。

5. 小心吸出上清液，留下覆蓋細胞沉淀的小體積的培養基。

6. 補充適當體積的PRIME-XV T細胞CDM，相當于200 U / mL（11,000 IU / mL）的IL-2。

7. 將5×106PBMCs /孔置于35mL培養基中。

8. 添加以下可溶性激活抗體：

LEAF純化的抗人CD3濃度為10μg/ mL（克隆UCHT1）LEAF純化的抗人CD28濃度為5μg/ mL（克隆CD28.2）

9. 將細胞在37℃和5％CO2的培養箱中孵育。

第3天：繼續刺激

10. 以200 U / mL（11,000 IU / mL）添加額外的IL-2。

第7天：媒體交流

11. 通過從井的頂部邊緣緩慢移液，移除25mL廢介質，小心避免意外吸入細胞。

12. 輕輕旋轉或重新懸浮剩余的液體，使細胞均勻分散細胞計數。

13. 加入30 mL新鮮培養基補充劑，IL-2，200 U / mL（11,000 IU / mL）。

第10天：繼續刺激

14. 以200 U / mL（11,000 IU / mL）添加額外的IL-2。第14天：收獲細胞

15. 通過從井的頂部邊緣緩慢移液，移除25mL廢介質，小心避免意外吸入細胞。

16. 輕輕旋轉或重新懸浮剩余的液體，使細胞均勻分散細胞計數。

17. 以剩余體積收獲細胞。

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