堿性蛋白酶(AKP)測試盒
測定方法: 微量法
測定規(guī)格: 100T/48S
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個月
注 意: 正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義:
AKP是指在堿性條件下催化蛋白質(zhì)肽鍵水解的酶類,屬于蛋白酶。此外,該酶還能夠水解酯鍵、酰胺鍵,具有轉(zhuǎn)酯及轉(zhuǎn)肽的功能。該酶是主要工業(yè)用酶之一,廣泛應(yīng)用于制藥、絲綢、食品、制革等行業(yè)。
測定原理:
在堿性條件下,AKP水解酪蛋白生成;在堿性條件下,還原磷鉬酸生成鎢藍(lán);鎢藍(lán)在680nm有特征吸收峰,測定680nm吸光度增加速率,來計算AKP活性。
自備儀器和用品:
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、水浴鍋、磁力攪拌器、可調(diào)式移液槍、0.5 mL EP管和蒸餾水。
粗酶液提取:
1.組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)冰浴勻漿,8000g,4℃離心10min,取上清,即粗酶液。
2.血清或培養(yǎng)液:直接測定。
3.按照細(xì)胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
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