. 對于固定的細胞或組織：
a. 對于細胞或組織樣品，固定后，適當洗滌去除固定劑。隨后如果需要進行免疫熒光染色，則*行免疫熒光染色，染色完畢后再按后續(xù)步驟進行Hoechst 33258染色。如果不需要進行其它染色，則直接進行后續(xù)的Hoechst 33258染色。
b. 對于貼壁細胞或組織切片，加入少量Hoechst 33258染色液，覆蓋住樣品即可。對于懸浮細胞，至少加入待染色樣品體積3倍的染色液，混勻。室溫放置3-5分鐘。
c. 吸除Hoechst 33258染色液，用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5分鐘。
d. 直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。細胞發(fā)生凋亡時，會看到凋亡細胞的細胞核呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染。

2. 對于活細胞或組織：
a. 加入適當量Hoechst 33258染色液，必須充分覆蓋住待染色的樣品，通常對于六孔板一個孔需加入1ml染色液，對于96孔板一個孔需加入100微升染色液。
b. 在適宜于細胞培養(yǎng)的溫度培養(yǎng)20-30分鐘。棄染色液，用PBS或培養(yǎng)液洗滌2-3次即可進行熒光檢測